电话：13601437756

---

扫一扫 加我微信

全球化背景下，新发突发传染病频发对公共卫生应急体系提出严峻挑战，流行病学溯源作为疫情防控的核心环节，需快速明确病原体基因型特征、传播链及变异趋势，为精准防控提供科学依据。荧光定量PCR技术因具备高灵敏度、特异性及实时检测优势，已成为病原体检测与溯源的核心技术平台。博清生物科技（南京）有限公司自主研发的荧光定量PCR仪系列产品，整合多重荧光检测、精准温控等关键技术，适配不同应用场景需求。

一、材料与方法

（一）实验仪器与试剂

1、核心仪器：博清生物荧光定量PCR仪，配套荧光定量分析软件；

2、试剂：病毒/细菌核酸提取试剂盒、多重荧光定量PCR试剂盒；

3、标准品与对照：BRV、BCoV、K99标准菌株（ATCC编号分别为VR-99、VR-808、ATCC 25944），人苍白杆菌标准菌株（CMCC 45234），阴性对照为无酶纯水。

（二）实验样本

1、临床样本：126份牧区发热患者血液样本、89份腹泻患者粪便样本（来源于某三级医院传染病科）；

2、环境样本：60份农贸市场环境涂抹样本、45份饮用水样本；

3、溯源验证样本：某地区聚集性疫情相关的32份密切接触者咽拭子样本。

（三）实验方法

1、核酸提取

采用博清生物核酸提取试剂盒，按照说明书操作提取样本核酸，荧光计定量（1-20μL 样本体积），确保核酸浓度≥5ng/μL，纯度A260/A280为1.8-2.0。

2、多重荧光定量PCR体系建立

基于目标病原体基因序列（GenBank数据库下载），设计特异性引物与探针（DNAstar V7.1 软件），优化反应体系：2×PCR Mix10μL，引物混合物（10μmol/L）2μL，探针混合物（5μmol/L）1μL，模板核酸2μL，补水至20μL。反应条件：预变性95℃ 3min；95℃ 10s，退火温度58-62℃（梯度优化）30s，40个循环，六通道同时采集荧光信号。

3、方法学验证

灵敏度：对10倍梯度稀释的标准品进行检测，记录最低检出浓度；

特异性：交叉检测其他常见病原体（如沙门氏菌、甲型流感病毒等），验证无交叉反应；

重复性：对同一批样本进行3次重复检测，计算Ct值变异系数（CV）。

4、流行病学溯源分析

结合样本采集时间、空间分布及Ct值数据，通过MEGA 5.1软件构建系统发育树，分析病原体基因型特征，追溯传播链；利用仪器配套软件进行病毒载量动态监测，评估传播风险。

二、结果

（一）仪器性能验证

博清生物荧光定量PCR仪在六通道检测模式下，各通道荧光信号无交叉干扰（CV<1.2%）；精准温控系统使孔间温度差≤±0.3℃，循环阈值（Ct）重复性良好（CV<2.0%）。8孔/16孔型号在现场检测中，单批次样本检测时间≤90min，适配移动实验室应急需求。

（二）检测灵敏度与特异性

建立的三重荧光定量PCR体系对BRV、BCoV、K99的最低检测限分别为3.8fg/μL、4.2fg/μL、5.1fg/μL，人苍白杆菌最低检测限达3.67fg/μL（Ct=36.40）；与15种非目标病原体无交叉反应，特异性达99.2%。

（三）流行病学溯源效能

1、临床样本检测：126份血液样本中人苍白杆菌检出率17.46%（22/126），89份粪便样本中BRV、BCoV、K99联合检出率24.72%（22/89），与测序结果一致性达98.3%；

2、环境样本溯源：从农贸市场样本中检出2株BCoV阳性，基因型与同期临床病例分离株同源性99.5%，明确环境传播途径；

3、聚集性疫情追踪：通过32份密切接触者样本的基因分型与病毒载量监测，成功构建3条传播链，识别出2名隐性感染者为传播源头，为防控措施调整提供依据。

三、讨论

流行病学溯源的核心需求是快速明确病原体“来源-传播-变异”链条，荧光定量PCR技术作为分子溯源的关键工具，其检测性能直接影响防控效率。博清生物荧光定量PCR仪通过以下技术优势适配公共卫生应急需求：

（一）多场景适配性：96孔高通道型号满足大规模筛查需求，8孔/16孔便携式型号适配现场应急检测，解决传统仪器“实验室局限”问题，实现“临床-环境-密切接触者”全链条样本同步检测；

（二）高精准检测能力：六通道无干扰设计支持多重病原体同时检测，结合自主研发的“实时动态精准温控技术”，显著提升低载量样本检出率，为隐性感染溯源提供技术支撑；

（三）溯源效率提升：相较于传统单重PCR，该仪器检测时间缩短40%以上，配套软件可直接输出基因型分析与系统发育树数据，减少溯源分析周期，助力疫情快速处置。

本研究验证了该仪器在细菌、病毒类病原体溯源中的应用价值，与相关研究结果一致。在聚集性疫情中，通过病毒载量动态监测与基因分型结合，可精准识别传播源头与风险人群，弥补传统流行病学调查“时空模糊”的缺陷。此外，仪器兼容多种核酸提取试剂盒，降低基层实验室应用门槛，具备规模化推广潜力。

局限性方面，本研究样本量集中于特定地区，不同病原体的溯源效能需进一步扩大样本验证；未来可结合数字PCR、二代测序技术，构建“快速筛查-精准溯源-变异监测”一体化平台，提升新发突发传染病防控的前瞻性。

博清生物科技（南京）有限公司研发的荧光定量PCR仪凭借高灵敏度、多通道兼容及场景适配性优势，在病原体检测、基因分型及传播链追溯中表现优异，可有效支撑公共卫生应急响应与疫情流行病学溯源工作。该仪器的推广应用有助于提升基层实验室溯源能力，为疫情防控“早发现、早处置”提供关键技术保障，具有重要的公共卫生价值。