猪繁殖与呼吸综合征（猪蓝耳病，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种高度传染性疫病，以母猪繁殖障碍（流产、死胎）和仔猪呼吸道症状为主要特征，严重影响全球养猪业经济效益。该病的早期精准诊断是防控关键，其中酶联免疫吸附试验（ELISA）因操作简便、成本可控、适合批量检测，成为 PRRS 抗体筛查的主流技术。

酶标仪作为ELISA检测的核心设备，其检测精度、稳定性直接决定诊断结果可靠性。博清生物科技（南京）有限公司研发的酶标仪作为国产主流设备，具备多通道检测、智能数据分析等功能，但目前针对其在猪蓝耳病诊断中的专项性能评估研究较少。本研究通过临床样本检测，对比进口标准酶标仪，系统验证博清生物酶标仪在猪蓝耳病ELISA诊断中的应用价值，为临床检测提供数据支持。

一、材料与方法

（一）实验材料

1、样本来源：150份猪血清样本均来自河南、山东等地规模化猪场，涵盖仔猪（30日龄内）、育肥猪（120日龄左右）及成年母猪，样本采集后- 20℃冷冻保存，检测前室温解冻并充分混匀。

2、检测试剂盒：猪蓝耳病抗体ELISA检测试剂盒，符合GB/T 27982-2011《猪繁殖与呼吸综合征诊断技术》标准。

3、仪器设备：博清生物酶标仪；标准酶标仪，作为对照仪器；移液器、恒温孵育箱等。

（二）实验方法

1、样本处理：将冷冻血清样本室温解冻后，3000r/min离心5min，取上清液备用，避免溶血样本参与检测。

2、ELISA操作：严格按照试剂盒说明书进行操作，步骤如下：

加样：每孔加入稀释后的血清样本100μL，空白孔加稀释液100μL，阳性对照、阴性对照各设3孔，37℃孵育60min；

洗板：用洗涤液洗板5次，每次浸泡30s，拍干残留液体；

加酶标二抗：每孔加酶标二抗100μL，37℃孵育30min，重复洗板步骤；

显色：每孔加底物液A、B各50μL，37℃避光孵育15min；

终止：每孔加终止液50μL，10min内完成酶标仪检测。

3、酶标仪检测：分别使用博清生物酶标仪和对照酶标仪，在450nm波长下读取各孔OD值，计算样本S/P值（S为样本OD值，P为阳性对照平均OD值）。判定标准：S/P≥0.4为阳性，S/P<0.4为阴性。

4、数据分析：采用SPSS 26.0软件进行数据统计，计算博清生物酶标仪与对照仪器的检测一致性（Kappa值）、灵敏度（真阳性率）、特异性（真阴性率）；选取10份阳性样本、10份阴性样本，重复检测3次（批内）、连续检测3天（批间），计算变异系数（CV）评估重复性。

二、结果

（一）检测结果一致性

150份血清样本经两台仪器检测，结果显示博清生物酶标仪检出阳性样本57份、阴性样本93份；进口对照酶标仪检出阳性样本58份、阴性样本92份。两台仪器检测结果一致的样本共147份，一致性率为98.0%，Kappa值为0.95（Kappa>0.75，表明一致性极佳）。

（二）灵敏度与特异性

以进口对照酶标仪检测结果为“金标准”，计算博清生物酶标仪的诊断性能：

灵敏度=真阳性数/（真阳性数+假阴性数）=55/（55+2）=96.5%

特异性=真阴性数/（真阴性数+假阳性数）=92/（92+1）=98.9%

假阳性率=1-特异性=1.1%，假阴性率=1-灵敏度=3.5%

（三）重复性

批内重复性实验中，博清生物酶标仪检测阳性样本OD值的CV为1.2%~2.1%，阴性样本CV为1.5%~2.3%；批间重复性实验中，阳性样本CV为1.5%~2.5%，阴性样本CV为1.8%~2.8%，均低于ELISA检测要求的CV≤5%标准，表明仪器重复性良好。

三、讨论

本研究从一致性、诊断性能、重复性三个维度，系统评估了博清生物酶标仪在猪蓝耳病ELISA诊断中的应用价值，结果显示该仪器具备以下优势：

（一）检测一致性高：与进口标准酶标仪的一致性率达98.0%，Kappa值0.95，说明其检测结果可与国际主流仪器对标，避免因仪器差异导致的诊断偏差，适合临床批量样本筛查。

（二）诊断性能可靠：灵敏度96.5%、特异性98.9%，假阴性率仅3.5%，可有效减少“漏诊”风险（尤其针对早期感染猪只）；假阳性率1.1%，降低“误判”导致的过度防控成本，符合猪蓝耳病防控中“早发现、少误判”的需求。

（三）稳定性强：批内、批间CV均低于5%，表明仪器在多次检测、不同时间点检测中性能稳定，不受操作环境（如室温波动）的轻微影响，适合基层实验室长期使用。

对比同类研究，国产酶标仪在猪疫病诊断中的性能已逐步接近进口仪器，且博清生物酶标仪还具备操作界面简洁（支持中文）、检测速度快（每板检测时间≤5min）、维护成本低等优势，更适配我国基层兽医实验室的使用场景。

本研究的局限性在于样本来源集中于华北地区，后续可扩大样本地域范围（如南方高湿地区），并结合PRRSV不同基因型（如经典株、高致病性株）样本，进一步验证仪器的普适性；同时可探索该仪器在猪蓝耳病抗原ELISA检测中的应用，拓展其诊断场景。

博清生物科技（南京）有限公司研发的酶标仪在猪蓝耳病抗体ELISA诊断中，具有检测一致性高、灵敏度与特异性优异、重复性稳定的特点，且操作便捷、成本可控，能够满足临床检测与科研实验对猪蓝耳病精准诊断的需求，可作为国产酶标仪在动物疫病诊断领域的优选设备之一。